叶绿素丙酮溶液在和nm波长下比色，所得的光密度（OD）值代人下列公式可计算出溶液中叶绿素a，b的量和a/b的比值：
1仪器设备
研钵、分光光度计（如国产UV-或型紫外可见分光光度计）等。
2操作方法
2.1叶片叶绿素的含量测定：精密称取叶片0.1~0.5g，剪碎放入研钵中，加入少量细石英砂研成糊状，用80%丙酮水溶液分批提取叶绿素，直到残渣无色为止。将丙酮提取液过滤后定容，并经适当稀释后比色定量。
2.2绿色水体中叶绿素含量的测定：量取一定体积的样品水，经纤维素膜过滤，将藻类滤出，滤干后连滤膜一起放入一定体积的丙酮，在暗中放置数小时后比色。
2.3叶绿体制剂中叶绿素的含量测定：吸取叶绿体制剂的悬浮液0.1ml（约含叶绿素40μg）加到存有4.9ml80%丙酮的离心管中，振荡摇匀，离心后，即可比色。
3注意事项
3.1提取叶绿素过程中尽量避免光照、以免叶绿素受光分解。提取过程中可适当加温，以加快提取速度，但要补足丙酮因挥发而减少的量。
3.2有些植物材料的细胞间质的酸度很高，在磨碎过程中会使叶绿素脱镁成去镁叶绿素，从而降低了测定值。因此，在磨碎这些材料时要加入pH8左右的缓冲液一起研磨，并适当提高丙酮浓度，使混合后的丙酮浓度达到80%。文献中报道研磨时加入硫酸镁是作为研磨剂用的，它与间质中的酸性物质反应的速度是很慢的，不足以使酸性物质与叶绿素反应造成脱镁。
3.3使用的分光光度计一定要用光分辨率高的型号如型。分辨率低的测定波长的半波宽大，不足以区分叶绿素a，b的吸收峰，易造成读数偏低，a，b比偏小的现象。分光光度计使用前应作波长校正，稍有偏差也可造成相当大的误差。校正方法是：测定叶绿素a丙酮溶液的红光最大的吸收峰必须在波长nm处。