随后，我们将带测定叶绿素含量的植被叶片放入仪器右侧上方的测量板，并轻轻按压至其合并；待其出现“嘀”的一声提示音后，出现如下图所示的界面，说明仪器已经完成对第一个数据的测定。其中，显示N=1这一字符表示当前已经对第一个叶片的数据完成了测定，其叶绿素含量为41.8。
测定时需要保持好力度。力度过大，可能会使得叶片破碎；力度过小，则可能导致无法测得数据。
随后，不断重复这一测定操作，从而测定同一株植被中不同叶片的叶绿素含量，方便我们后期取多次测量的平均值作为该株植被的叶片叶绿素含量，从而提升结果精度。需要注意，对同一株植被的测定过程中，不要进行定标操作，否则会使得前期测定的数据都丢失。
例如，下图表示进行到了第3次测量，且第3次测量的结果值为39.8。
如果在测定过程中出现如下图所示的报错情况，一般是处于测定板中的植被叶片没有放好；我们在当前叶片的另一个位置进行测定即可。
测定时，若出现结果数值大于50的情况，会出现如下图所示的星号*提醒。这是因为用SPAD-叶绿素仪测定的结果在大于50时，其精度会下降。
测定过程中，我们可以按下“DATARECALL”按钮，用散点图的形式回顾之前测定的数据。此时，再按下“DATARECALL”按钮，可以在不同数据之间切换。
在切换到某一点后，我们可以按下“1DATADELETE”按钮，将当前点的数据删除，并直接进行再一次测定。如下图所示，我们就将第10个点的数据删除了，因此其数值目前显示为--.-。
当我们测定了足够的点后，按下“AVERAGE”按钮，即可对前期所测定的所有点的数值进行求平均；这一平均值就是该株植被的叶片叶绿素含量平均值。这里需要注意两点——首先，获得某一株植被的叶片叶绿素平均值后，需要尽快记录在手机等其他设备中或记录本上；因为SPAD-叶绿素仪自身是不会保存数据的，一旦重新定标或关机，之前测定的全部数据都会丢失。其次，SPAD-叶绿素仪最多保存30个点的数据，多出的数据会覆盖前期的数据。
随后，通过“ALLDATACLEAR”按钮，即可将当前测定的所有点的数据一次性删除。按下“ALLDATACLEAR”按钮一次后先是进入删除提示界面，如下图所示；再按下“ALLDATACLEAR”按钮一次后即可删除全部数据。
删除全部数据后，即可开始对第二株植被的叶片叶绿素含量进行测定。可以看到，此时屏幕中又出现了N=0这一字符，直接依据前述步骤进行测定即可。
完成全部植被的数据测定与结果记录后，将仪器关闭即可。