植物类胡萝卜素含量检测试剂盒(货号:AKPL)
类胡萝卜素(Carotenoids)是一类重要的天然色素的总称,普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类的黄色、橙红色或红色的色素之中,类胡萝卜素是体内维生素A的前体,同时还具有抗氧化、免疫调节、抗癌、减轻心血管疾病及着色剂等作用。
类胡萝卜素在±10nm处具有特殊吸收峰,样本经溶剂提取后在此波长下可检测其含量。含叶绿体的组织样本,需排除叶绿素a和叶绿素b对类胡萝卜素的干扰,根据经验公式计算出叶绿素a和叶绿素b的含量,再进一步得出类胡萝卜素的含量;不含叶绿素的组织可以直接根据类胡萝卜素的经验消光系数进行计算。
植物类胡萝卜素含量检测原理需自备试剂:丙酮(CHO,MW=58.08,CAS:67-64-1);
测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、丙酮和蒸馏水。
1.植物样品的处理(可根据预实验结果适当调整样本量及比例)
①新鲜植物叶片或其它组织使用蒸馏水清洗干净,吸干表面水分,去除中脉,称取约0.1g,剪碎放入研钵或匀浆器中;
②加入1mL蒸馏水和少量试剂一(约10mg),在黑暗或弱光条件下充分研磨,转入15mL试管/离心管中;
③使用提取液冲洗研钵,将所有冲洗液转入15mL试管/离心管中,提取液定容至10mL,置于黑暗条件下或锡箔纸避光浸提3h(期间颠倒混合2-3次),观察底部组织残渣接近于白色则提取完全,若组织残渣未完全变白,继续浸提至组织残渣颜色接近白色即为浸提液。
2.测定步骤
(1)黄色或其他非绿色组织(不含叶绿体)类胡萝卜素含量测定步骤
①分光光度计预热30min以上,调节波长至nm,提取液调零;
②取1mL上层浸提液于1mL玻璃比色皿中,测定nm处吸光值,记为A。
(2)新鲜植物叶片或其他绿色组织(含叶绿体)类胡萝卜素含量测定步骤
①分光光度计预热30min以上,调节波长至nm、nm和nm,提取液调零;
②取上层浸提液1mL于1mL玻璃比色皿中,测定nm、nm和nm处吸光值,分别记为A、A和A。
注:若上层浸提液有残渣,建议吸取1.5mL上层浸提液置于1.5mL棕色离心管,rpm常温离心5min,取上清液再进行检测。
注意事项
①为避免色素见光分解,操作时应尽量避光,研磨或匀浆时应尽量缩短时间;
②若不确定组织中有无叶绿素影响,可取样本浸提液采用分光光度计在波长-nm下进行扫描,-nm之间有吸收峰则表明存在叶绿体;
③若测定吸光值超过1.0,建议将浸提液使用提取液适当稀释后再进行测定,计算时相应调整(按实际稀释倍数调整计算公式中D);若测定吸光值小于0.05时,可适当减少提取过程中提取液的用量后再进行测定,计算时相应调整(按实际提取后总体积调整计算公式中V提);
④为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。
ForResearchUseOnly.NotforUseinDiagnosticProcedures.