叶绿素(Chlorophyll)检测试剂盒(微板法)检测原理是叶绿素不溶解于水,而溶于有机溶剂,以有机溶剂粗提叶绿素,根据朗伯-比尔定律,某有色溶液的吸光度(A)与其中溶质浓度(C)和液层厚度(L)成正比,即A=αCL,其中α为比例常数,当溶液浓度以百分比浓度为单位,层液厚度为1cm时,α为该物质的吸光系数。在本试剂盒情况下,叶绿素a和叶绿素b在有最大吸收波,根据经验公式可计算出叶绿素a、叶绿素b及总叶绿素含量。该试剂盒主要用于植物组织中叶绿素的提取以及定量检测叶绿素a、叶绿素b及总叶绿素含量。该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
自备材料:
1.研钵或匀浆器
2.离心管
3.滤纸或纱布
4.96孔板
5.酶标仪
操作步骤:
1.叶绿素提取:
①取菠菜或其他植物新鲜叶片,洗净,擦干,去中脉,称取剪碎的新鲜样品0.1g,置于研钵或匀浆器,加入少量提取粉剂(约50mg)和1mlChlorophyllAssaybuffer,研磨或匀浆成液态。
②将研磨液或匀浆液转移离心管,用少量叶绿素提取液冲洗研钵或匀浆器数次,最后连残渣一同倒入离心管,补加ChlorophyllAssaybuffer,混匀,避光放置。
③观察底部组织残渣接近于白色,即为提取完全,如果仍有较多组织颜色,应再加入ChlorophyllAssaybuffer继续避光放置。
④滤纸或三层纱布过滤,留取滤液,即为叶绿素粗提液。
2.测定:取叶绿素粗提液加入96孔板的孔中,以酶标仪,以ChlorophyllAssaybuffer调零,测定粗提液在处吸光度(A、A)。
计算:
叶绿素a含量(mg/g)=Ca×S×V×N/(W×)
叶绿素b含量(mg/g)=Cb×S×V×N/(W×)
总叶绿素含量(mg/g)=CT×S×V×N/(W×)
式中:Ca=13.95×A-6.88×A
Cb=24.95×A-7.32×A
CT=6.63×A-18.07×A
S=检测溶液的试剂高度(ml),可通过测量或计算获得。
V=叶绿素粗提液体积(ml)=10(ml)
N=稀释倍数
W=样品鲜重或干重(g)
注意事项:
1.为了避免叶绿素见光分解,操作时应尽量避光,研磨或匀浆时应尽量缩短时间。
2.测定吸光度值大于1时,可适当稀释后再进行测定。
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性口罩。
保存条件:12个月有效。