德国WALZ公司生产的PAM-是一款非常经典的调制叶绿素荧光仪，其前身是PAM-和PAM-。PAM-的面世时间是年，至今已经有近30年的时间。在过去30年的时间里，使用该系列荧光仪发表的论文超过多篇，数据认可度是毋庸置疑的。究竟，PAM-能测哪些荧光参数呢？这个问题并不难回答，只要您在网上搜索PAM-就可以找到很多有关它的介绍，所有介绍中都清楚的列出如下参数：Fo、Fm、F、Fo’、Fm’、Fv/Fm、Y(II)、qL、qP、qN、NPQ、Y(NPQ)、Y(NO)、ETR、C/Fo，PAR和Temp。没错，通过PAM-测量慢速荧光诱导动力学曲线即可以非常迅速的得到上述参数。那么，何为慢速荧光诱导动力学曲线？它其实这是一个相对的概念，与之对应的是快速荧光诱导动力学曲线。根据最新版《叶绿素荧光仪基础实验教程》中有关荧光时域的划分。慢速荧光诱导动力学曲线测量是分钟尺度的，相对于快速荧光诱导动力学曲线的微秒/毫秒尺度，在时间上是慢的，原因如下：首先，PAM测量的慢速荧光诱导动力学曲线是一种稳态荧光分析，可以简称为诱导曲线（InductionCurve），也可以被叫做淬灭分析（QuenchingAnalysis）。即需要对样品照射一定强度的光，使其在光强下达到稳定状态，记录稳态的荧光产额F和Fm’。然而，除了光下稳态的荧光产额以外，还有另外两个非常重要的荧光参考值：Fo和Fm。Fo和Fm是叶绿素a荧光测量的关键参数，它们分别表示光系统II反应中心%开放和0%开放的两个极端，需要暗适应之后测量。极限的Fo和Fm可以用来评估进入光化学途径的激发能。Fm和Fo能级之间的差异(Fm-F0)对应于光系统II光化学淬灭能力的最大度量。齐活，有了暗适应的Fo和Fm和光下稳定状态的F和Fm’，我们就可以轻松的计算出光化学淬灭和非光化学淬灭。所以一条完整的慢速荧光诱导动力学曲线至少应该包含以上两部分测量。至于第三部分，就是Fo’，可以直接测量，也可以通过计算得来，暂不赘述。下面开始用PAM-收割数据，下面的操作可以在暗室内进行，或使用暗适应叶夹来完成。材料：PAM-，暗适应之后的叶片步骤：1，将暗适应的叶片夹到叶夹上，光纤对准叶片2，打开PAM-的软件PamWin3，初始化后会首先进入FieldScreen，点击Advanced进入高级设置界面。PamWin3软件FieldScreen界面3，调整测量光ML强度.Int和Gain，使得Ft在0.2-0.4之间。为保证数据的可比性，在一个实验体系内测量光强度Int.不可以更改，如果Ft偏离0.2-0.4区间，可以尝试调Gain达到上述要求。4，设置分析模式（AnalysisMode）：饱和脉冲分析SPAnalysis。PamWin3软件Advanced界面GeneralSettings5，检查光化光列表，务必保证软件调用的PARlist是准确的。不建议使用Default的列表。近两年的新机器会随机附带光强列表，以主机序列号标注，将光盘中的文件Copy到PamWin的安装目录下的Data_内即可调用。如下图所示。PARlist查看与调用选项（素材收集失误，背景为光曲线，请自觉屏蔽）6，设置光化光AL强度Int.，最适的光化光的强度因物种而异。个人建议用对照组(Control，CK)或野生型(WT)样品做预实验，摸索合适的光化光强度。为保证数据的可比性，一个实验体系须用同样的光化光强度。PAM-可以选择蓝光作为光化光。参考：Y(II)在Fv/Fm的一半。原则：以实现样品间最大区分度为目的。不同光化光强度产生的不同曲线轨迹（A光强太弱，D光强太强，推荐B，C）7，设置饱和脉冲SatPulse的强度Int.和时间Width。PAM-将测FoFm的饱和脉冲与测Fm’的饱和脉冲做了区分，通常默认即可。原则：饱和脉冲使反应中心全部关闭，但是饱和脉冲期间荧光不下降。8，设置慢速荧光诱导动力学曲线程序，标准默认设置Delay:40s，Clock:20s，Width:s。通常Delay和Clock的时间无需修改，Width的时间根据样品实际情况可延长或缩短。原则：样品在设定的光化光强度下达到稳定状态。达到稳定的慢速荧光诱导动力学曲线9，所有参数都设置好，就可以到SlowKinetics界面启动Start曲线测量，PAM-总共有四种测量模式，分别是Manual手动;Ind.Curve诱导曲线;Ind.+Rec.诱导曲线+暗弛豫;Trig.Run触发，Trig.Run.需先手动完成一个测量，生成Trig文件，才能使用Trig.Run。最常用的是Ind.Curve，如需暗弛豫可选择Ind.+Rec.选择合适的测量模式后，点击Start，剩下的就可以交给PAM-了。SlowKinetics的四种启动方式10，数据保存，您可以选择测量一条曲线保存一次数据，也可以选择所有测量结束后保存数据。保存数据需要从MearsureMode切换至ViewMode,切换方式在软件上方菜单栏Mode选项。切换至ViewMode后，点击软件上方菜单栏的File，选择Exportascsvfile,看到弹窗后选择All，即可把所有数据都保存，数据保存在PamWin安装目录下的Report文件夹，其中.pws的文件是可以用PamWin打开的格式。保存数据的同时会把Report中的数值导出，导出的数据存储在PamWin安装目录下的Export文件夹。数据文件夹通常以日期为文件名。保存的数据可以通过OpenReport打开。数据保存与打开以下是一个诱导曲线+暗弛豫（Ind.+Rec.）的测量案例，仅供参考：选择Ind.+Rec.点击Start曲线自动完成保存数据时可以输入注释标记测量Ind.+Rec.的曲线包含光诱导和暗弛豫两部分
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