叶绿素是高等植物和其它所有能进行光合作用的生物体含有的一类绿色色素，是植物进行光合作用时必须的催化剂，一般情况下可以用极性溶剂如丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯等提取叶绿素。今天就给大家分享一下在水果、蔬菜及其制品中如何通过分光光度法来测定叶绿素的含量。
1.范围
本标准规定了分光光度法测定水果、蔬菜及其制品中叶绿素含量的方法。
本标准适用于水果、蔬菜及其制品中叶绿素a含量、叶绿素b含量和叶绿素总含量的测定。
本标准方法中叶绿素a的线性范围为0.mg/g~0.mg/g，叶绿素b的线性范围为0.mg/g~0.mg/g。
2.原理
试样中的叶绿素用无水乙醇和丙酮1：1（V：V）混合液提取，试液分别测定nm和nm处吸光度值，利用Arnon公式计算试样叶绿素含量。
3.试剂
除非另有说明，所用水为（GB/T分析实验室用水规格和试验方法）中规定的三级水及以上，试剂均为分析纯试剂。
3.1无水乙醇。
3.2丙酮。
3.3提取剂：无水乙醇和丙酮1：1(V：V)混合液。
4.仪器
4.1分光光度计。
4.2分析天平(±0.01g)。
4.3高速组织捣碎机：0r/min~r/min。
5.分析步骤
5.1试样制备
5.1.1含水量较多的样品
取代表性样品，切碎，混匀，用组织捣碎机制成匀浆，备用。
5.1.2含水量较少的制品
取代表性样品，按1：1(m:m)的比例加入蒸馏水，用组织捣碎机制成匀浆，备用。
5.2试液制备
深绿色样品、准确称取0.5g试样于三角瓶中，加人mL提取剂。绿色样品，准确称取0.5g试样于三角瓶中，加入10mL提取剂。浅绿色样品，称取2.0g~5.0g试样于三角瓶中，加入10mL提取剂。三角瓶用封口膜密封，室温下避光静置提取5h，过滤，滤液待测。
注意：光照和高温会使叶绿素发生氧化和分解，试液制备时应避免高温和光照。
5.3试液的测定
以提取剂为空白溶液，凋零点。分别在nm和nm处测定试液的吸光度值。
6.结果计算
试样中叶绿素a含量、叶绿素b含量和叶绿素总含量均以质量分数w表示，单位为毫克每克（mg/g），分别按式（1）、式（2）和式（3）计算。
W1=（12.72×A1-2.59×A2）×v/（0×m）.........（1）
式中：
W1------叶绿素a含量，单位为毫克每克（mg/g）；
A1------试液在nm处的吸光值；
A2------试液在nm处的吸光值；
v------试液体积，单位为毫升（mL）；
m------试液质量，单位为克（g）。
计算结果保留3位有效数字。
W2=（22.88×A2-4.67×A1）×v/（0×m）..........（2）
式中：
W2------叶绿素b含量，单位为毫克每克（mg/g）
计算结果保留3位有效数字。
W3=（8.05×A1+20.29×A2）×v/（0×m）........（3）
W3------叶绿素总含量，单位为毫克每克（mg/g）
计算结果保留3位有效数字。
7.精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不大于这2个测定值算术平均值的10%。
方法整理：栢晖生物